鸡胚接种 名词解释 常用鸡胚接种方法有哪些

2019-10-28 18:58:42 来源：朵拉利品网

1, 名词解释 常用鸡胚接种方法有哪些

照蛋定位完毕后，即可开始接种。先用碘酊将接种位点和气室消毒，再用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。
尿囊腔接种：最常用的接种方法，鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。蛋壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔，用带5~7号针头的注射器插入孔内约1. 5cm，接种接种材料0. 1~0.2mL。进针时针头与蛋壳应保持30℃角，不应垂直进针，注射完毕，立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封，然后放回37℃孵化箱孵化72~120h。
绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。将卵壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口，用刀尖小心撬开蛋壳，不能损伤卵壳膜，形成卵窗。用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜，但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室小孔上吸气，使胚内造成负压，这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。用注射器滴加2~3滴接种物于卵窗的绒毛尿囊膜上，以透明胶纸封住卵窗。气室小孔用石腊密封，接种后的鸡胚平放在孵化箱中，卵窗向上，不要转运。
卵黄囊接种：适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣原体及立克次氏体的分离、培养。接种方法：气室端蛋壳消毒后，在气室中央打一小孔，用7号针头注射器垂直刺入约3cm，注射接种物约0.1~0.2mL。石蜡封口，继续在37℃孵化，每天翻蛋2次。

2, 鸡胚孵化和鸡胚病毒接种有哪些关键因素和步骤

[实验材料]
白壳鸡胚、孵化箱、1mL注射器、蛋架、新城疫工系和Ⅱ系弱毒苗等。
[实验准备]
1.鸡胚的选择和孵化应选健康无病鸡群或SPF鸡群的新鲜受精蛋。为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。用孵卵箱孵化，要特别注意温度、湿度和翻蛋。孵化条件一般选择相对湿度为60%，最低温度36℃，一般37.5℃。每日翻蛋最少3次，开始可以将鸡胚横放，在接种前2d立放，大头向上，注意鸡胚位置，如胚胎偏在一边易死亡。
孵化3~4d，可用照蛋器在暗室观察。鸡胚发育正常时，可见清晰的血管及活的鸡胚，血管及其主要分枝均明显，呈鲜红色，鸡胚可以活动。未受精和死胚胚体固定在一端不动，看不到血管或血管消散，应剔除。鸡胚的日龄根据接种途径和接种材料而定，卵黄囊接种，用6~8日龄的鸡胚；绒毛尿囊腔接种，用9~10日龄鸡胚；绒毛尿囊膜接种，用9~13日龄的鸡胚；血管注射，用12~13日龄鸡胚；羊膜腔和脑内注射，用10日龄鸡胚。
2.接种前的准备
病毒接种材料的处理怀疑污染细菌的液体材料，加抗生素（antibiotic）（青霉素100~500IU和链霉素100~500μg）置室温中1h或冰箱12~24h高速离心取上清液，或经滤器滤过除菌。如为患病动物组织，应剪碎、研磨、离心取上清液，必要时加抗生素（antibiotic）处理或滤过。
照蛋以铅笔划出气室、胚胎的位置（图12—1），若要作卵黄囊接种或血管注射，还要划出相应的部位。
打孔用碘酊在接种处的蛋壳上消毒，并在该处打孔。
[鸡胚的接种]
鸡胚接种一般用结核菌素注射器注射，注射完后均应用熔化的石蜡将接种孔封闭。
1.绒毛尿囊腔内注射取9~10日龄鸡胚，用锥子在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室顶端和气室下沿无血管处各钻一小孔，针头从气室下沿小孔处插入，深1.5cm，即已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距离（图12—2），注射量约O.1~O.2mL。注射后以石蜡封闭小孔，置孵育箱中直立孵育。
2.卵黄囊内注射取6~8日龄鸡胚，可从气室顶侧接种（针头插入3~3.5cm），因胚胎及卵黄囊位置已定，也可从侧面钻孔，将针头插入卵黄囊接种。侧面接种不易伤及鸡胚，但针头拔出后部分接种液有时会外溢，需用酒精棉球擦去。其余同尿囊腔内注射（图12—3）。
3.绒毛尿囊膜接种
人工气室法（图12—4）取10~11日龄鸡胚，先在照蛋灯下检查鸡胚发育状况，划出气室位置，并选择绒尿膜发育区作一“记号”。将胚蛋横卧于蛋座上，绒尿膜发育区“记号”朝上。用碘酒消毒记号处及气室中心部，在气室中心部锥小孔。然后用锥子轻锥记号处蛋壳，约0.5mm深，使其卵壳穿孔而壳膜不破。用洗耳球吸去气室部空气的同时，随即因上面小孔进入空气而绒尿膜陷下形成一个人工气室，天然气室消失（如图12—4）。接种时针头与卵壳成直角。自上面小孔直刺破卵膜进入人工气室约3~5mm，注入0.1~0.2mL病料，正好在绒尿膜上。接种完毕用熔化石蜡封闭两孔，人工气室向上，横卧于孵化箱中，逐日观察。
直接接种法将鸡胚直立于蛋座上，气室向上，气室区中央消毒打孔，用针头刺破壳膜，接种时针头先刺人卵壳约0.5cm，将病料滴在气室内的壳膜上（0.1~O.2mL），再继续刺入约1.0~1.5cm（图12—5），拔出针头使病料液即慢慢渗透到气室下面的绒尿膜上，然后用石蜡封孔，放人孵化箱培养。本方法的原理为：壳膜脆，刺破后不能再闭合，而绒尿膜有弹性，当针头拔出后被刺破的小孔立即又闭
4.羊膜腔内接种所用鸡胚为10日龄，有两种方法。
开窗法从气室处去蛋壳开窗，从窗口用小镊子剥开蛋膜，一手用平头镊子夹住羊膜腔并向上提，另一手注射0.05~0.1mL病料液人腔内，然后封闭人工窗，使蛋直立孵化，此法可靠，但胚胎易受伤而死，而且易污染。
盲刺法将鸡胚放在灯光向上照射的蛋座上，将蛋转动使胚胎面向术者。在气室顶部到边缘的一半处打一孔，用40mm长的针头垂直插入，约深30ram以上。如已刺入羊膜腔，能使针头拨动胚即可注入病料液0.1~0.2mL，如针头左右移动时胚胎随着移动，则针头已刺人胚胎，这时应将针头稍稍提起后再注射（图12—6）。拔出针头后石蜡封闭小孔。置孵化箱中培养。
[接种后检查]
接种后24h内死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去，24h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放入冰箱，于一定时间内不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死。死亡的鸡胚置冰箱中1~2h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。

名词解释

气室

鸡蛋气室；弹簧制动气室。

接种

接种（inoculate/vaccinate）意为注射疫苗以预防疾病。微生物学术语，食用菌栽培学术语：接种 inoculation ，按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程。

蛋壳

卵生动物的卵外壳，起保护卵生动物的卵作用。构成蛋壳主要有两部分：一是由蛋白质纤维所构成的基质，二在蛋白质基质上堆积钙质的结晶物。

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